科研与合作R & D AND COOPERATION

普通转录组测序

?转录组测序分析的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有mRNA的总和。转录组研究是基因功能及结构研究的基础和出发点,通过新一代高通量测序,能够全面快速地获得某一物种特定组织或器官在某一状态下的几乎所有转录本序列信息。


技术优势

 ·周期短,通量高,性价比高

 ·准确的数字化信号,专业的检测通量,广泛的检测范围,富涵7大功能注释数据库,准确描述基因功能,建立差异表达分析,有效挖掘功能基因

 ·适用于研究基因功能、信号通路、可变剪接和新转录本预测等问题,是研究细胞表型和功能的重要手段


服务流程

样本要求

样本类型

样本要求

保存及运输条件

说明内容

新鲜组织

新鲜组织标本(肿瘤样本在术后30分钟内取得)≥50 mg(黄豆粒大小)可采用以下方法:1.RNAlater:尤其适用于肿瘤组织,离体后于冰上快速切成小块,组织块直径最好介于1-5 mm(小米至绿豆大小),浸泡在5倍体积的RNAlater中,充分浸润(最好 4℃过夜,以保证浸润效果),-80℃保存;如果是肿瘤样本,应尽可能准确地判定肿瘤组织和正常组织。

  1. 2.TRIzol:在冰上快速分成小块,组织块直径最好不大于5 mm(绿豆大小)浸泡于TRIzol中,冻存管或者离心管封口膜封好后送样。

  2. 3.液氮:离体后液氮速冻充分,预冷冻存管,将组织转移至冻存管中,液氮可长期保存。

干冰运输

建议样本备份1-2份,收样后立即提取。

细胞

提取mRNA需细胞数量>5×106个,lncRNA需>1×107个。

1.悬浮细胞收集用PBS缓冲液快速洗一次,每5×106个细胞加入1 mL TRIzol,用移液器吹散,溶液呈清亮不粘稠状;-80℃保存不超过1个月;

2.贴壁细胞需将培养基尽量吸弃;按每10 cm2培养面积(相当于六孔板一个孔或35 mm直径培养皿)加1 mL TRIzol;移液器反复吹打,使TRIzol完全接触长有细胞的培养瓶表面,充分消化;转移到RNase-free的离心管中,用一次性注射器反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块,整个溶液呈清亮不粘稠状,-80℃保存。

干冰运输

建议样本备份1-2份,收样后立即提取。

外周血(RNA

1.TRIzol15 mL管中加入6 mL TRIzol2 mL新鲜血液(TRIzol:血液=31),移液器吹打以帮助裂解样品中的细胞;样品剧烈震荡混匀1-2 min,直到絮状物全部溶解;室温孵育5 min 使核蛋白体完全分解;封口膜封存,-80℃冻存。注意:冰冻血液溶解过程中会有破碎的细胞释放RNA酶,因此建议在冰冻前加入TRIzol,切勿直接冻存新鲜血液,保存好的血液应避免反复冻融。离心得到白细胞或有核细胞,可加TRIzol-80℃保存,干冰运输。

2. BD PAXgene Blood RNA Tube:人类血液样本推荐使用,采集量为2 mL左右,18-25℃可保存3天,2-8℃可保存5天,-20℃或-70℃至少可稳定50个月。

3.使用RNAlock血液RNA稳定剂保存,新鲜抗凝血液:血液RNA稳定剂=13,盖上管盖,上下颠倒混匀8-10次。室温放置2 h以上后低温保存;含有血液RNA稳定剂的人血液样品可在2-8℃保存5天,或在-20℃条件下至少保存三个月;含有血液RNA稳定剂的哺乳动物血液样品可在15-25℃保存2天,2-8℃保存7天,或在-20℃条件下至少保存六个月。

TRIzol保存法需干冰运输;BD PAXgeneBlood RNA Tube 保存法可使用足量冰袋,用泡沫箱运输。


Total

RNA

RNA溶解于DEPC水或者RNase-free的缓冲液中。总量≥2 μg;纯度OD260/280≥2.0;完整性RIN≥8.0;浓度≥100 ng/μL

使用1.5 mL2 mL离心管盛放,用parafilm封口膜密封,然后将样本管置于保护用的50 mL离心管或其他类似容器里,并旋紧盖子。使用足量冰袋,用泡沫箱运输。